發(fā)布日期：2018-01-31
人EGFR突變基因檢測(cè)目前是表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）治療的重要檢測(cè)靶點(diǎn)。隨著核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，相關(guān)突變基因檢測(cè)越來越受到臨床專家和行業(yè)研究人員關(guān)注。不同于目前臨床常規(guī)成熟且推薦的檢測(cè)技術(shù)，新的檢測(cè)技術(shù)如何定位，臨床個(gè)體化應(yīng)用與臨床個(gè)體化研究兩者存在的差異如何解決，臨床轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究如何有效轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用，這些人EGFR突變基因檢測(cè)試劑申報(bào)過程中的共性問題，都將是今后注冊(cè)審評(píng)關(guān)注重點(diǎn)。
1.產(chǎn)品說明書中預(yù)期用途的表述
目前該類產(chǎn)品申報(bào)說明書中存在預(yù)期用途指向不明確、表述不清晰等問題。申請(qǐng)人需規(guī)范預(yù)期用途表述形式，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)與腫瘤個(gè)體化診療藥物聯(lián)合治療情況客觀描述產(chǎn)品預(yù)期用途。依據(jù)《體外診斷試劑產(chǎn)品說明書指導(dǎo)原則》要求，預(yù)期用途應(yīng)規(guī)范EGFR不同突變基因型別表達(dá)形式，明確產(chǎn)品外顯子、突變位點(diǎn)、cosmic代碼等信息。
申請(qǐng)人需依據(jù)自身完成的藥物診療個(gè)體化伴隨檢測(cè)研究工作，注意寫明申報(bào)產(chǎn)品與個(gè)體化腫瘤藥物聯(lián)合臨床研究相關(guān)信息。介紹EGFR突變基因檢測(cè)的臨床背景，包括檢測(cè)相關(guān)適用人群特征、腫瘤組織類型、適用樣本類型、待測(cè)靶基因序列特征及選擇依據(jù)，靶基因及其表達(dá)蛋白在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到的作用，相關(guān)藥物或其他治療技術(shù)及其作用機(jī)理、與待測(cè)突變位點(diǎn)可能存在的關(guān)系等。
2.臨床研究相關(guān)問題
研究表明，EGFR突變基因人群之間存在種族差異。亞裔人群中非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變基因陽性率明顯高于高加索人群，但目前我國人群腫瘤突變基因數(shù)據(jù)庫缺乏，申請(qǐng)人進(jìn)行該試劑注冊(cè)申報(bào)前均需完成我國境內(nèi)臨床研究資料，滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求，且需提供EGFR基因型與腫瘤個(gè)體化治療臨床意義相關(guān)研究資料。非小細(xì)胞肺癌人群中，如申報(bào)產(chǎn)品部分可檢測(cè)基因型未發(fā)現(xiàn)存在該類突變基因陽性結(jié)果，可能與該部分突變基因在我國人群突變頻率較低或總樣本人群選擇存在偏倚有關(guān)。針對(duì)該類問題，建議申請(qǐng)人擴(kuò)大臨床樣本人群或根據(jù)不同突變基因突變頻率特點(diǎn)，增加不同地域的臨床研究機(jī)構(gòu)，提高這部分突變基因陽性檢出率。
3.關(guān)于檢測(cè)人外周血樣本相關(guān)問題
申報(bào)產(chǎn)品中最常見的樣本類型為中性福爾馬林固定石蠟包埋病理組織（病理），且獲取腫瘤基因相關(guān)信息的主要來源仍是腫瘤病理組織樣本。研究結(jié)果表明，隨著腫瘤細(xì)胞的凋亡，腫瘤游離DNA（ctDNA）片段釋放到人體血液循環(huán)中，通過對(duì)外周血腫瘤游離DNA的檢測(cè)解讀，也可以較好地了解腫瘤病情的發(fā)展情況以及尋找適合的治療方案；尤其對(duì)于那些無法通過手術(shù)取得腫瘤組織或希望在治療后對(duì)病情進(jìn)行跟蹤隨訪的人群，是一種理想和有效的檢測(cè)手段。但由于血液游離DNA含量及變異情況會(huì)隨著腫瘤病情的發(fā)展、轉(zhuǎn)移性腫瘤的發(fā)生以及用藥治療情況發(fā)生實(shí)時(shí)的變化，外周血檢測(cè)EGFR突變基因檢測(cè)結(jié)果存在一定的不確定性。兩種樣本在用于人EGFR-TIK治療效果也存在差異。
鑒于上述原因，人EGFR突變基因檢測(cè)試劑如適用于外周血樣本檢測(cè)人群，預(yù)期用途應(yīng)限定為晚期NSCLC患者，且作為不能獲取NSCLC組織樣本時(shí)的補(bǔ)充手段。鑒于病理組織樣本和外周血樣本中EGFR突變基因比例不同，申報(bào)產(chǎn)品需分別對(duì)檢測(cè)外周血樣本和病例組織樣本進(jìn)行最低檢出限的研究。
4.關(guān)于適用樣本采集儲(chǔ)存相關(guān)問題
病理組織樣本需詳細(xì)介紹組織學(xué)樣本類型，包括樣本來源及取材要求、組織標(biāo)本采集厚度、樣本處理方式（如組織樣本的固定及包埋方式）、腫瘤細(xì)胞比例等。在對(duì)核酸序列進(jìn)行檢測(cè)前，需對(duì)用于腫瘤組織突變基因檢測(cè)的標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估，并富集存在EGFR突變基因的腫瘤細(xì)胞用于核酸提取。腫瘤細(xì)胞所占比例需達(dá)到所用檢測(cè)方法的要求。
外周血采集后，需通過驗(yàn)證試驗(yàn)規(guī)定外周血存放條件以及存放時(shí)限及溫度設(shè)置等，包括采用加入抗核酸降解的采血管要求。樣本采集管或保存管中所用的防腐劑、抗凝劑、保護(hù)劑等輔助成分不應(yīng)對(duì)基因序列擴(kuò)增產(chǎn)生干擾。血液通常需要先進(jìn)行抗凝保存，應(yīng)關(guān)注抗凝劑的選擇。申請(qǐng)人需對(duì)抗凝劑、防腐劑、保護(hù)劑等成分進(jìn)行驗(yàn)證。
因外周血中ctDNA含量低，為提高EGFR突變基因檢出率，在臨床允許的情況下推薦增加血漿用量。抽血后延遲血漿分離會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞裂解，釋放出基因組DNA至血漿中；大量增加的基因組DNA會(huì)稀釋腫瘤來源的ctDNA，使得突變難以檢出。因此在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及儲(chǔ)存過程中，防止游離DNA降解是首要考慮因素；其次，也應(yīng)防止血液中白細(xì)胞裂解，避免因野生型DNA增加導(dǎo)致ctDNA中EGFR突變基因無法檢測(cè)。
5.產(chǎn)品研發(fā)申報(bào)難點(diǎn)
人EGFR突變基因檢測(cè)試劑聯(lián)合治療產(chǎn)品，用于指導(dǎo)用藥或者預(yù)后判斷，該類產(chǎn)品屬于伴隨診斷產(chǎn)品，與治療藥物使用安全有效密切相關(guān)。美國FDA曾發(fā)布伴隨診斷產(chǎn)品指導(dǎo)文件，鼓勵(lì)申請(qǐng)人同步進(jìn)行治療產(chǎn)品與伴隨診斷產(chǎn)品研發(fā)與上市前申請(qǐng)。器審中心鼓勵(lì)申請(qǐng)人在伴隨診斷試劑研發(fā)時(shí)應(yīng)充分聯(lián)合治療藥物對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。但國內(nèi)具體開發(fā)創(chuàng)新性腫瘤個(gè)體化藥物的生產(chǎn)企業(yè)較少，目前多為國外專利期到期后腫瘤個(gè)體化藥物的仿制藥研究。這也給從事該類體外診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)開展創(chuàng)新性腫瘤個(gè)體化伴隨臨床研究帶來困難。
來源：中國健康傳媒集團(tuán)-中國食品藥品網(wǎng)
