發(fā)布日期:2017-05-05
眼睛是心靈的窗戶。如果在骨骼上也有這樣的一扇窗戶,那么我們就能透視骨髓,能更好地研究其發(fā)育及相關(guān)疾病。如今,加州理工學(xué)院(California Institute of Technology)開發(fā)的一項(xiàng)新技術(shù)就可以使完整的骨骼“透明”,使研究人員能夠用光學(xué)顯微鏡直接透視觀察骨髓中的干細(xì)胞。這項(xiàng)發(fā)表于《科學(xué)》子刊《Science Translational Medicine》上的技術(shù)突破可以讓人們更好地測試骨質(zhì)疏松癥等骨骼疾病藥物的療效。
在健康的骨骼中,新生骨質(zhì)的成骨細(xì)胞(osteoblast)和分解舊骨質(zhì)的破骨細(xì)胞(osteoclast)之間存在著動(dòng)態(tài)而微妙的平衡。該過程由骨髓中的干細(xì)胞部分控制,后者即是骨祖細(xì)胞(osteoprogenitor)。骨祖細(xì)胞會(huì)分化成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞,以對(duì)骨骼系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)節(jié)和維持。這一機(jī)制對(duì)骨骼的健康十分重要。骨質(zhì)的持續(xù)性凈流失會(huì)增加發(fā)生骨折的風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥。為了有效應(yīng)對(duì)這一疾病,我們必須研究骨髓中干細(xì)胞的行為。然而,這一個(gè)罕見的細(xì)胞群體,以一種不均勻的方式分布在整個(gè)骨骼中。
▲骨質(zhì)的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)(圖片來源:《Nature Medicine》)
“由于骨骼干細(xì)胞群體的稀缺性,僅從幾份骨骼切片的觀察中是難以推斷出其總體的數(shù)量和位置的,”文章共同第一作者Alon Greenbaum博士說道:“另外,骨骼切片的取樣過程本身就會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)流失,破壞骨骼中干細(xì)胞的所處復(fù)雜微環(huán)境,因此我們還是需要能在完整的骨骼組織內(nèi)進(jìn)行觀察。”
為了做到這一點(diǎn),文章作者們采用了CLARITY技術(shù)。這一手段最初由當(dāng)時(shí)還在斯坦福大學(xué)(Stanford University)進(jìn)行博士后研究工作的Alon Greenbaum博士開發(fā),可使得諸如大腦這樣的軟組織變得透明。CLARITY技術(shù)會(huì)從細(xì)胞中去除不透明的脂質(zhì)分子,同時(shí)還輸入透明的水凝膠以提供結(jié)構(gòu)支持。后來,Alon Greenbaum博士在加州理工的團(tuán)隊(duì)擴(kuò)大該技術(shù)的應(yīng)用范圍,實(shí)現(xiàn)讓整個(gè)小鼠身體中的軟組織變得透明?,F(xiàn)在,該團(tuán)隊(duì)決定更進(jìn)一步,找到了讓骨骼這樣的硬組織透明化的方法,即Bone CLARITY。
▲Bone CLARITY技術(shù)的透視骨骼成像(圖片來源:《Science Translational Medicine》)
研究人員構(gòu)建了骨祖細(xì)胞被紅色熒光標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因小鼠,使得這些Sox9-tdTomato+骨祖細(xì)胞得以被光學(xué)成像。就這樣,小鼠股骨、脛骨和脊柱的骨骼被取樣,每個(gè)樣品的長度約為幾厘米。接著,研究人員從骨骼去除鈣質(zhì),因?yàn)殁}質(zhì)會(huì)使得骨組織不透明。之后,骨骼樣品被灌注入水凝膠,將蛋白質(zhì)和核酸等細(xì)胞組分固定在其原有位置,并保留了樣品的結(jié)構(gòu)。最后,他們用柔和的去垢劑流過整個(gè)骨骼樣品以洗去脂質(zhì),最終使骨骼變得透明。研究團(tuán)隊(duì)還專門開發(fā)了一個(gè)定制的單層光顯微鏡(light-sheet microscope),以對(duì)被如此處理過的骨骼樣品進(jìn)行快速且高分辨率的成像,以避免熒光信號(hào)的衰減。在骨骼樣品中,我們清楚的看到被紅色熒光標(biāo)記的骨祖細(xì)胞。
為了將Bone CLARITY付諸藥物開發(fā)的實(shí)踐,研究者們與安進(jìn)(Amgen)公司進(jìn)行了合作,測試一種正在開發(fā)中的用于治療骨質(zhì)疏松癥新藥,后者是靶向sclerostin蛋白的抗體。
“我們在安進(jìn)的合作者提供了一種可增加骨質(zhì)的在研新藥,”文章共同第一作者、在讀研究生Ken Y. Chan說:“然而,該藥對(duì)干細(xì)胞群體的影響還不清楚,我們認(rèn)為它可能會(huì)促進(jìn)干細(xì)胞的增殖。” 為了驗(yàn)證這一點(diǎn),研究人員給了一組小鼠施用了sclerostin抗體,然后用Bone CLARITY將其脊柱與對(duì)照組進(jìn)行比較。“我們看到,這種藥物確實(shí)使干細(xì)胞的數(shù)量增加,”他說道:“監(jiān)測干細(xì)胞對(duì)這些藥物的反應(yīng)是至關(guān)重要的,因?yàn)樽畛醯母杉?xì)胞增殖肯定是需要的,由于骨骼正在新生,但長期干細(xì)胞增殖則可能導(dǎo)致癌癥。”
此外,該技術(shù)還將有助于了解骨骼與身體其他部位的相互作用。
▲文章通訊作者Viviana Gradinaru教授(圖片來源:加州理工學(xué)院)
“生物學(xué)家們已經(jīng)開始認(rèn)識(shí)到,骨骼的作用不僅僅是結(jié)構(gòu)支持,”文章通訊作者Viviana Gradinaru教授說道:“例如,來自骨骼的激素會(huì)被發(fā)送之大腦,以調(diào)節(jié)食欲。另外,頭骨和大腦之間的相互作用界面是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的重要研究方向。我們希望,Bone CLARITY技術(shù)將在理解這些重要器官內(nèi)在運(yùn)作機(jī)制上創(chuàng)造新的突破。”
參考資料
[1] Bone CLARITY: Clearing, imaging, and computational analysis of osteoprogenitors within intact bone marrow
[2] Transparent bones enable researchers to observe the stem cells inside
來源:學(xué)術(shù)經(jīng)緯